在规范的西方印迹（WB）办法中，蛋白质样品经过变性SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）依据它们的分子量进行别离，转移到膜上，并经过抗体的免疫检测进行剖析。

　　碱性磷酸酶（AP）染色是一种累积检测体系。在显影过程中能够轻松调查到色彩沉积，而且当到达所需的信号强度时能够中止染色反响。与增强化学发光（ECL）检测比较，AP染色的灵敏度较低，但不需求特别的成像设备来调查检测成果。

　　重要提示：一些蛋白质需求特别的要求才干杰出别离（例如未煮沸的样品或特别的凝胶体系）。请参阅各自数据表中关于西方印迹的补白部分。

　　6、完好的染色溶液：每10 ml底物缓冲液中含有80 µl BCIP溶液和60 µl NBT溶液。运用前短时刻预备此溶液。

　　运用SDS-PAGE别离待检测的蛋白质样品和分子量规范，并经过电泳转印到硝酸纤维素膜上。依照您的SDS-PAGE和转印设备的制造商阐明操作。

　　2、用水冲刷膜以去除Ponceau S染色溶液，并在室温下在实验室摇床顶用5%脱脂牛奶-TBST孵育30分钟。

　　3、在室温下在实验室摇床顶用新鲜的5%脱脂牛奶-TBST含有恰当稀释的一抗孵育至少2小时，或在4°C下过夜。

　　5、用新鲜的5%脱脂牛奶-TBST含有引荐的AP偶联二抗（例如抗小鼠IgG，抗兔IgG）在恰当的稀释下至少孵育1小时。

　　8、替换新鲜的完好的染色溶液并显影15-30分钟。假如信号十分强或弱，能够恰当缩短或延长时刻。

　　注：Synaptic Systems规范协议在SYSY实验室中产生了杰出的成果，并能用作参阅。但是，为了取得高的特异性信号和低的非特异性布景信号，有必要独自确认适宜的抗体浓度、孵育温度和孵育时刻。

　　艾美捷科技是Synaptic Systems的我国代理商，为科研工作者供给优质的产品与服务。回来搜狐，检查更加多