CKMB 肌酸激酶同工酶MB 测定干片 （速率法）使用说明书 805 8232 800 1133 ［产品的名字］ 通用名称：肌酸激酶同工酶MB 测定干片 （速率法） 英文名称：VITROS Chemistry Products CKMB Slides ［包装规格］ 300 片，90 片 ［ 用途］ 只用于体外诊断。 肌酸激酶同工酶MB 测定干片 （速率法）通过在VITROS 250 全自动生化分析仪，VITROS 350 全自动 生化分析仪， VITROS 950 全自动生化分析仪，VITROS 5,1 FS 全自动生化分析仪，VITROS 4600 全 自动生化分析仪及VITROS 5600 全自动生化免疫分析仪上定量测定血清中的肌酸激酶同工酶 MB (CK- MB) 活性。 肌酸激酶同工酶 MB 主要存在于心肌中，但骨骼肌中也有微量同工酶存在。在心肌梗塞中，CK-MB 活 性会升高，这也是此实验大范围的应用的最主要临床意义。 CK-MB 活性通常在心肌梗塞后的 12 至 2 时内达到顶峰，然后在无并发症的情况下，在 48 至 72 小 时后恢复到正常水平。 CK-MB 活性在心肌炎、Duchenne 肌肉萎缩症、多发性肌炎、横纹肌溶解症和其它心肌或肌病性功能 1 紊乱等症中也会升高。 ［检验原理］ 肌酸激酶同工酶MB 测定干片（速率法）方法通过在VITROS 250 全自动生化分析仪，VITROS 350 全 自动生化分析仪， VITROS 950 全自动生化分析仪， VITROS 5,1 FS 全自动生化分析仪，VITROS 4600 全自动生化分析仪及VITROS 5600 全自动生化免疫分析仪上使用肌酸激酶同工酶MB 测定干片 （速率法）和胆碱酯酶与肌酸激酶同工酶复合校准品来完成。 肌酸激酶同工酶MB测定干片（速率法）为涂覆在聚酯基材上的多层分析成分。将一滴患者样本滴在干 片上，并通过扩散层均匀地分布到下面的试剂层。该层含有表面活性剂、N-乙酰半胱氨酸(N- acetylcysteine, NAC) （激活 CK 而不需对样本做预处理)和山羊抗人 CK-M 抗体(抑制肌肉 CK-MM 活 性和约 50% 的心肌CK-MB 活性）。余下的 CK 活性代表 50% 总 CK-MB 同工酶浓度加上任何 CK-BB （相对较少）。在试剂层中，样本中的肌酸激酶催化肌酸磷酸盐 (creatine phosphate) 和腺苷二磷酸 (adenosine diphosphate, ADP) 向肌酸和腺苷三磷酸 (adenosine triphosphate, ATP) 转化。在甘油激酶 (glycerol kinase) 的作用下，甘油发生磷酸化反应，转变为 L-α-甘油磷酸 (L-α-glycerophosphate) ；然 后在 L-α-甘油磷酸氧化酶催化的反应中，L-α-甘油磷酸被氧化为磷酸二羟 (dihydroxyacetone phosphate) 和H2O2 。最后，过氧化氢在过氧化物酶 (peroxidase) 的作用下氧化无色染剂，生成一种 染料。干片支持层上的低波长滤光片使染剂形成过程中入射光线的无效速率影响减少到最小。然后将反 射强度的变化率转换为酶的活性。 1 / 13 使用说明书 CKMB 反应步骤： 抗CK-M抗体 CK-MM + CK-MB 抑制CK-M 肌酸激酶-B 肌酸磷酸盐 + ADP 肌酸 + ATP NAC,Mg+2 甘油激酶 甘油 + ATP L-α -甘油磷酸 + ADP L-α -甘油磷酸氧化酶 L-α -甘油磷酸 + O 磷酸二羟 + H O 2 2 2 过氧化物酶 H O + 无色染剂 染料 + 2H O 2 2 2 实验类型和实验条件： 实验类型 VITROS 系统 大约孵育时间 温度 波长 标本量 VITROS 250 全自动生化分析仪， VITROS 350 全自动生化分析仪， VITROS 950 全自动生化分析仪， 37℃ 多点速率法 5 分钟 670nm 11µL VITROS 5,1 FS 全自动生化分析仪， (98.6°F) VITROS 4600 全自动生化分析仪及 VITROS 5600 全自动生化免疫分析仪 不是在所有的 都能得到产品和系统。 ［主要组成成分］ 干片成分 干片图示 2 每cm 的反应成分 L-α-甘油磷酸氧化酶 (L-α-glycerophosphate oxidase) （绿色气球菌 (Aerococcus 1.干片上层 2.扩散层（TiO ） 2 viridans)，E.C.1）0.39 U；过氧化物酶 (peroxidase) （辣根 ·N-乙酰半胱氨酸 (horseradishroot)，E.C.）1.4 U；甘油激酶 (glycerol kinase) （大肠杆菌 ·山羊抗人CK-M 抗体i) 或纤维单胞菌 (Cellulomonas sp)，E.C.0）0.45 U；肌酸磷酸 3.试剂层 ·腺苷二磷酸 (creatinephosphate) 0.17 mg；N-乙酰半胱氨酸 (N-acetylcysteine) 43 µg ；山羊 ·醋酸镁 抗人CK-M 抗体 (goat anti-human CK-M antibody) 0.25 mg； 醋酸镁 ·无色染剂 (magnesium acetate) 68 µg ；甘油 (glycerol) 23 µg；2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)- ·甘油激酶 4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑 (2-(3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl)-4,5-bis(4- ·过氧化物酶 ·L-α-甘油磷酸氧化酶 dimethylaminophenyl)imidazole) （无色染剂）20µg ；腺苷二磷酸 (adenosine ·肌酸磷酸盐 diphosphate) 8.4 µg 。 ·甘油 ·缓冲液，pH 7.0 其它成分 4.支持层 色素、粘合剂、缓冲液、表面活性剂、抑制剂、稳定剂、交联剂、染剂增溶剂、 5.滤光片 ·低波长截止滤光片 滤光染剂、清除剂和螯合剂 6.干片下层 2 / 13 使用说明书 CKMB 提供的实验材料： ·肌酸激酶同工酶MB 测定干片（速率法） 自备材料： ·胆碱酯酶与肌酸激酶同工酶复合校准品 ·质控品，如VITROS 同工酶质控品(Isoenzyme Performance Verifier) ·VITROS 7%牛血清白蛋白溶液 ·VITROS FS 稀释包2 (Diluent Pack 2) （牛血清白蛋白溶液/盐水）（用于分析仪上稀释） ［储存条件及有效期］ 当依规定储存和操作肌酸激酶同工酶 MB 测定干片（速率法）时，该试剂在包装盒上标注的有效期内 是稳定的，超过效期的产品不能使用。 肌酸激酶同工酶MB 测定干片（速率法）的储存与稳定性 干片盒 储存条件 稳定性 未开封 冷冻 ≤ -18 °C(≤0 °F) 18 个月 分析仪上 系统开启 1 周 已开封 分析仪上 系统关闭 2 小时 ·以下情况下，应使用质控品检验系统性能： －如果系统关闭超过2 小时。 －重新装载先前从干片供应仓中取下并储存用作以后使用的干片盒。 ［适用仪器］ VITROS 250 全自动生化分析仪，VITROS 350 全自动生化分析仪， VITROS 950 全自动生化分析 仪，VITROS 5,1 FS 全自动生化分析仪，VITROS 4600 全自动生化分析仪及VITROS 5600 全自动生 化免疫分析仪。 ［样本要求］ 建议使用的标本： ·血清 3 切记：某些采集装置已被报告会影响其它分析物和测试。 由于可获得的样本采集装置的多样性， Ortho-Clinical Diagnostics 公司无法就这些装置对其产品的性能提供明确声明。 确信你的采集装置和此测试兼容。 不建议使用的标本： ·血浆： EDTA 肝素(Heparin) 血清： 标本的采集与准备 4, 5 请采用标准实验室操作采集标本。 注： 有关最小样本量的详细要求，请参考相应VITROS 生化系统的操作说明。 3 / 13 使用说明书 CKMB 患者准备 · 采集样品前不需要患者作特殊的准备。 格外的注意事项 6 离心分离标本，应在采集后 时内从细胞成分中取 清。 标本的处理与储存 ·应在有盖容器中处理和储存样本，避免污染和蒸发。 ·轻轻地颠倒混匀样本，并平衡至18– 28℃( – 82°F)室温，然后立即做多元化的分析。 CKMB 标本的储存与稳定性：血清6 贮存 温度 稳定性 室温 18-28℃( -82℉) 时 冷藏 2-8℃(3 6℉) 2 天 冷冻 ≤-18℃(≤0℉) 1 年 ［检测验证的方法］ 操作说明: ·至少每日检查一次试剂库存 ，确保试剂足够用于计划的工作量。 ·有关更多信息，请参阅相应VITROS 生化系统的操作说明。 切记：做多元化的分析前将所有液体和样本平衡至18–28℃( –82°F)，然后立即做多元化的分析。 样本稀释: 血清 如果肌酸激酶同工酶MB 活性超出系统的可报告范围，则按如下步骤操作： 手工样本稀释 1. 使用 VITROS 7% 牛血清白蛋白溶液稀释样本； 2. 重新分析； 3. 结果乘以稀释因子，获得原始样本中肌酸激酶同工酶MB 浓度的估计值。 分析仪上样本稀释（仅适用于VITROS 5600 全自动生化免疫分析仪 （VITROS 集成系统），VITROS 5,1 FS 全自动生化分析仪，VITROS 4600 全自动生化分析仪，VITROS 250 全自动生化分析仪和 VITROS 350 全自动生化分析仪） 有关在分析仪上稀释操作的更多信息，请参阅VITROS 生化系统的操作说明。对于VITROS 5600 全自 动生化免疫分析仪（VITROS 集成系统），VITROS 5,1 FS 全自动生化分析仪，VITROS 4600 全自动 生化分析仪，使用VITROS FS 稀释包2 (FS Diluent Pack 2 进行稀释。 4 / 13 使用说明书 CKMB 操作步骤： 干片盒处理 注意：请不可以使用损坏或密封不严的干片盒。 ·检查包装是否有损坏迹象。 ·用锋利器具打开外包装时要小心，避免损伤内部的单独产品包装。 干片盒准备 切记：在打开干片盒的包装并将其装载到干片供应仓之前，干片盒一定要达到室温18–28℃( –82°F)。 1.从冰箱中取出干片盒。 2.将未开封的干片盒回温到室温，时间60 分钟。 3.打开干片盒并装载到干片供应仓中。 注：干片盒达到室温18–28℃ ( –82°F) 后，应在2 时内装载。 校准： 所需的校准品 胆碱酯酶与肌酸激酶同工酶复合校准品 校准品的准备、处理和储存 请参阅胆碱酯酶与肌酸激酶同工酶复合校准品 的使用说明书。 校准操作 请参阅相应VITROS 生化系统的操作说明。 何时需要校准 在以下情形下有必要进行校准： ·干片批号改变时。 ·因维修或维护而更换重要系统零部件时。 法规要求时。 －例如， CLIA 规范要求每6个月至少进行一次校准或校准确认。 在以下情形下，VITROS CKMB实验也在大多数情况下要校准： ·质控结果持续超出可接受的范围。 ·在执行某些维修程序之后。 有关更多信息，请参阅相应VITROS 生化系统的操作说明。 校准的有效性 校准参数由VITROS 250全自动生化分析仪，VITROS 350全自动生化分析仪，VITROS 950全自动生化分 析仪与一系列质量参数对照进行自动评估，可在Coefficients and Limits （系数和极限）菜单中查看这些参 数 （对于VITROS 5600全自动生化免疫分析仪 （VITROS集成系统），VITROS 5,1 FS全自动生化分析 仪，VITROS 4600全自动生化分析仪，请查看Review Assay Data （检查实验数据）菜单）。不能满足任 何设定的质量参数都可能会导致校准失败。将校准报告与质控值相结合来判断校准的有效性。 5 / 13 使用说明书 CKMB 质量控制: 步骤建议 ·CK-MB对样本处理方法很敏感。 ·参照临床相关范围选择质控水平。 ·在处理患者样品之前或过程中，以与分析患者样本相同的方式分析质控品。 ·以下情况需要分析质控品来检验系统性能： －校准后； －按照本地规范进行，或者至少在实验室做时每天一次。 －完成一定的操作次数后；请参阅相应VITROS 生化系统的操作说明。 ·如果质控结果超过可接受的范围，请在决定发报告之前进行有关的分析和研究。 9 ·有关质控的一般建议，请参考《定量测定的统计质控：原理和定义，批准指南－第三版》或其它已公布 的指南。 ·有关更多信息，请参阅相应VITROS 生化系统的操作说明。 质控品选择 切记： 建议您配合VITROS 生化系统使用VITROS 质控品(Performance Verifier)。 在使用其他市售质控液前，需评估是不是适合此检测验证的方法。 ·在以下条件下，使用不相同于VITROS 质控品时与其它肌酸激酶同工酶检测的新方法比较，结果会有差异： – 基质。 －含有高浓度防腐剂、稳定剂或其它非生理性添加剂。 ·不可以使用乙二醇(ethylene glycol) 作为稳定剂的质控物。 质控品的准备和储存 请参阅VITROS 同工酶质控品(Isoenzyme Performance Verifier) 的使用说明书 或参阅其他厂商的产品说明书。 ［参考值（参考范围）］ CK-MB 活性升高是心肌梗塞 (MI) 的一个灵敏而特异的指标。心肌梗塞的诊断不应只建立在 CK-MB 的测定结果上，而应有其它临床和实验室参数支持。有必要进行临床诊断来判定 CK-MB 的测定结果。 只是根据单次测定值进行判定，所测值是有限的，因为 CK-MB 峰值持续的时间很短。与任何 CK-MB 方法一样，如果样本测定值与峰值前后偏移较大，则结果可能为 。大多数临床研究都建议每隔 8 至 12 小时采集一次样本。 若符合下述三个标准，则 CK-MB 结果通常认定为阳性： 10 1. CK-MB 活性一定要有显著的水平；建议采用 16 U/L 的判定值。 小于 16 U/L 的值应报告为 CK- MB ，并且不应计算 %CK-MB 值。 2. CK-MB 测定结果应在总 CK 值的 4% 与 25% 之间。如果 % CK-MB 值超出此范围，则可以是心肌 梗塞以外引起的结果偏高。 CK-MB % CK-MB= ×100 CK 6 / 13 使用说明书 CKMB 例如： • CK-MB 4% 骨骼肌含有一些 CK-MB，显著的骨骼肌损伤可以导致 CK-MB 活性升高。CK-MB 在肌肉中的百分比 较低，但 CK-MB 在总CK 中的百分比可能会保持正常 (4%)。 • CK-MB 25% 干片的结果其实就是 CK-MB 的 B 亚单位的测定结果，所以，CK-BB 或大分子CK I 类及II类的存在 可导致根据 CK 活性估计的 CK-MB 测定结果上升到两倍。大于 25% 的根据结果得出存在 CK-BB 或大 分子CK I 类及II类。这样的结果应通过另一种方法来证实。 3. CK-MB 活性升高到峰值大约在梗塞形成后的 18 小时，随后又下降，这是心肌梗塞的特征。在循环 中 CK 变化相对来说比较稳定，无显示升降特性。 建议用于心肌梗塞诊断的三个判校准准是由 T. C. Kwong 博士提供 10 。这些标准建立在对纽约罗彻斯 特大学医学中心 (University of Rochester Medical Center) 冠状动脉护理部的 134 名患者的研究之 上。各实验室都应根据其所服务的当地人群具体状况来确认和使用该实验方案。 选择的标准应使测定诊断效率达到最高，其中： 真实阳性数+真实 数 诊断效率（%） ×100 总患者数 每个实验室因为年龄、性别、饮食、种族和心肌梗塞的患病率不同，而判校准准可能不同。根据检验测试 的特定用途，判校准准可调整到适合某个阳性预测值或 预测值。下表给出了与一种电泳实验比 较，不同峰值 CK-MB 的临界值影响实验灵敏度和特异性的情况。 该实验的另一个用途是筛查出可能患心肌梗塞的患者，并通过其它方法来确认阳性结果。总 CK 值处 于正常范围不代表可以不作CK-MB 分析。11 CK-MB 峰值不同临界值对灵敏度和特异性的影响 CK-MB 临界值(U/L) 灵敏度(%) 特异性(%) 有效性(%) 10 96 79 86 12 96 89 92 14 93 93 93 16 91 94 93 18 85 95 91 20 82 96 90 22 78 96 89 24 78 98 90 报告单位和单位转换: VITROS 生化系统可通过选择使用常规单位、国际单位和替代单位来报告CK-MB 分析结果。 CK-MB 报告单位和单位转换 常规和国际单位 替代单位 U/L μ kat/L(U/L ×0.0167) 7 / 13 使用说明书 CKMB 图1. 结果判定：快速参考指导 否 根据临床症状和体征怀 考虑使用其它诊断方法 疑有心肌梗塞？ 是 连续进行CK-MB 检测，正确判定CK-MB 测定 结果需要所有连续测试的资料，总CK-MB 值正 常并不意味着不需要测定CK-MB 否 峰值结果16U/L CK-MB MB 或更高%？ 是 否 %MB 至少4% ？ CK-MB （高U/L MB 值但低MB%可能有骨骼肌损伤） 是 否 CK-MB （%MB 大于25%可能是人分子CK 或CK- %MB 小于25% ？ BB 引起，测定结果应通过其它办法来进行确认，并应使 用其它临床/实验室参数做评估。 是 否 CK-MB 与心肌梗塞一致 （一致，但升高的CK-MB 可能是典型大分子CK 或CK- 是 BB 所致） 与心肌梗塞一致 ［检验结果的解释］ 根据在所定义的孵育期间对干片的反射率在 670 nm 下的连续读取值，能确定反射率的变化率。该反 射率变化率用于软件自带的.多点速率法 (multi-point rate).校准数学模型，以计算酶的活性。只要对每个 干片批次进行了校准，则未知样本的肌酸激酶 MB活性可以从已测定的每个未知实验干片反射率变化来 确定。 8 / 13 使用说明书 CKMB ［检测验证的方法的局限性］ 已知干扰物质: 12 13 14 • CK-BB （存在于新生儿 、脑局部缺血、小脑血肿、休克 和癌 症患者样品中）和大分子 CK I 类 及 II 类会使 CK-MB 结果假性升高。这些结果可以与由于缺少特征性 CK-MB 时间规律的真实 CK-MB 结果区别开来。请参阅 “实验的局限性”一节。 • 大于 1000 U/L 的总 CK 活性可能会引起 CK-MB 结果升高。总 CK 1000 U/L 的样本在分析前应进行 稀释； VITROS CKMB 干片方法按照 临床实验室标准委员会实验方案 (NCCLS Protocol) EP7 15 对干扰物 质进行筛查。表中列出的物质在指明的浓度下进行实验时，将引起列出的偏差。 对于经过实验不引起干扰的物质，请参阅“特异性”一节。 肌酸激酶同工酶 平均偏差 MB活性 干扰物* 干扰物浓度 常规/ 国际 替代单位 常规/ 国际 替代单位 单位(U/L) μkat/L 单位(U/L) μkat/L 抗坏血酸(Ascorbic acid) 3 mg/dL(170μ mol/L) .67 -6 -0.10 泛影酸钠(Diatrizoate sodium) .67 -12 -0.20 835mg/dL(13.1 mmol/L) （海帕凯） 安乃近(Dipyrone) 6 mg/dL(180μ mol/L) 48 0.80 -4.3 -0.07 胆红素(Bilirubin) 5mg/dL(86μ mol/L) 10 0.17 +2.6 +0.04 * 可能会遇到其它干扰物。这些测定结果有代表性，但是测定结果会因为每次实验的变化而有轻微差异。 所列浓度范围之外的干扰程度尚不能预知。 其它局限性: 已知某些药物和临床状况会改变体内的肌酸激酶MB活性。有关更多信息，请参阅已 的摘要。16-18 ［产品性能指标］ 可报告范围： 常用单位和国际单位(U/L) 替换单位(µkat/L) 2.7-300.0 0.05-5.01 对于范围外的样本，查阅“样本稀释” 校准的溯源性: 用于 CKMB 测定的胆碱酯酶与肌酸激酶同工酶复合校准品的赋值，可溯源至斯堪的纳维亚酶委员会 7, 8 (Scandinavian Committee on Enzymes)建议的肌酸激酶活性方法 ，即在 37℃ 下测定剩余 CK-B 亚 单位活性的“CK-M”免疫抑 (CK-M Immunoinhibition method)。 9 / 13 使用说明书 CKMB 方法比较: 下列图表显示在 VITROS 750全自动生化分析仪上分析的样本与使用斯堪的纳维亚酶委员会 (Scandinavian Committee on Enzymes) 7,8 建议的确定肌酸激酶活性方法的修改方法测定剩余 CK-B 亚 单位活性的.CK-M.免疫抑制方法 (CK-M Immunoinhibition method) 分析的样本的比较结果。实验符合 19 临床实验室标准委员会实验方案 (NCCLS Protocol) EP9。 这个表格也显示了在VITROS 250全自动生化分析仪，VITROS 350全自动生化分析仪， VITROS 950 全自动生化分析仪上和在VITROS 750全自动生化分析仪上分析的血清样本的比较结果，以及在 VITROS 5,1 FS全自动生化分析仪与VITROS 950全自动生化分析仪之间的血清样本分析结果比较。另 外，这些表格显示了在VITROS 5600全自动生化免疫分析仪和VITROS 5,1 FS全自动生化分析仪上分析 20 的血清样本结果比较。测试遵守了全国临床实验标准委员会EP9草案。 CKMB 测定的方法比较：血清 常用单位和SI单位(U/L) 替换单位(µkat/L) n 斜率 相关系数 样品活性范围 截距 Sy.x 样品活性范围 截距 Sy.x 750 vs. 对照法 92 1.02 0.997 3–284 -0.30 7.38 0.05–4.7 -0.01 0.12 250 vs. 750 58 1.01 0.999 3– 157 +0.16 0.51 0.05–2.6 0.00 0.01 950 vs. 750 118 1.02 1.000 3–278 -0.01 1.7 5–4.6 0.00 0.03 5,1 FS vs. 950 106 0.98 0.999 4–245 +1.31 2.66 0.07–4.1 +0.02 0.04 5600 vs. 5,1 94 1.00 1.000 3–283 +0.79 1.53 0.05–4.72 +0.01 0.03 FS † 分析处理硬件和软件运算法则在VITROS 4600 化学系统与应用于VITROS 5,1 FS 化学系统上的设计是相同的；VITROS 4600 系统的检测性能被证明与 VITROS 5,1 FS 系统旗鼓相当。因而，VITROS 4600 系统具备VITROS 5,1 FS 系统的所有性 能特点。 精密度: 遵照全国临床实验标准委员EP5 草案，曾用VITROS 250 全自动生化分析仪，VITROS 750 全自动生 化分析仪， VITROS 950 全自动生化分析仪和VITROS 5,1 FS 全自动生化分析仪上的质量控制材料评 21 定了精密度 。遵照全国临床实验标准委员EP5 草案，同样用VITROS5600 全自动生化免疫分析仪上 22 的质量控制材料对精密度进行了评定。 所展现的数据只代表了测试性能，并作为一个准则。可变因素 如样本处理和贮存，试剂处理和贮存，实验环境和系统维护能影响测试结果的成效性。 10 / 13 使用说明书 CKMB 常用单位和SI单位(U/L) 替换单位(µkat/L) 实验室内 实验室内 实验室内 * ** * ** ** 平均活性 日内SD SD 平均活性 日内SD SD CV% 观察数 天数 39 1.1 3.1 0.7

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