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大鼠脑源性神经养分因子(BDNF)酶联免疫剖析试剂盒运用指南共享
发表时间: 2025-06-20 18:49:47 作者: 品质保证
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中脑源性神经养分因子(BDNF)含量。
本试剂盒运用双抗体夹心法测定标本中大鼠脑源性神经养分因子(BDNF)水平。用纯化的大鼠脑源性神经养分因子(BDNF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次参加脑源性神经养分因子(BDNF),再与HRP符号的脑源性神经养分因子(BDNF)抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过完全洗刷后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的效果下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的脑源性神经养分因子(BDNF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),经过规范曲线核算样品中大鼠脑源性神经养分因子(BDNF)浓度。
1. 血清:室温血液天然凝结10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如呈现沉积,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求挑选EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测排泄性的成份时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度到达100万/ml左右。经过重复冻融,以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
5. 安排标本:切开标本后,称取分量。参加必定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷冻保存备用。标本消融后仍就坚持2-8℃的温度。参加必定量的PBS(PH7.4),用手艺或匀浆器将标本匀浆充沛。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。分装后一份待检测,其他冷冻备用。
6.标本收集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行试验。若不能立刻做试验,可将标本放于-20℃保存,但应防止重复冻融
7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3按捺辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
1、规范品的稀释:本试剂盒供给原倍规范品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
160ng/L 5号规范品 150μl的原倍规范品参加150μl规范品稀释液
80ng/L 4号规范品 150μl的5号规范品参加150μl规范品稀释液
40ng/L 3号规范品 150μl的4号规范品参加150μl规范品稀释液
20ng/L 2号规范品 150μl的3号规范品参加150μl规范品稀释液
10ng/L 1号规范品 150μl的2号规范品参加150μl规范品稀释液
2、加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作相同)、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品精确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
4、配液:将30倍(48T的20倍)浓缩洗刷液用蒸馏水30倍(48T的20倍)稀释后备用
5、洗刷:当心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
9、显色:每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色10分钟.
11、测定:以空白孔调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加停止液后15分钟以内进行。
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗刷液可能会呈现结晶分出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗刷时不影响成果。
3.各步加样均应运用加样器,并常常校正其精确性,以防止试验误差。一次加样时刻最好控制在5分钟内,如标本数量多,引荐运用排枪加样。
4.请每次测定的一起做规范曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于规范品孔榜首孔的OD值),请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定,核算时请最终乘以总稀释倍数(×n×5)。
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